SC∕T 7204.5-2020 对虾桃拉综合征诊断规程第5部分:逆转录环介导核酸等温扩增检测法(水产)

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2021-12-23

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JCS 65.020.30,?41,←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7204.5一2020,对虾桃拉综合征诊断规程,第5部分:逆转录环介导核酸,等温扩增检测法,Diagnostic protocols for taura syndrome of penaeid shrimp一,Part 5: Reverse transcription loop- mediated isothermal amplification,2020 - 08 - 26 发布2021-01 - 01 实施,:引〈中华人民共和国农业农村部发布,SC/T 7204. 5- 2020,第4 部分H1/J~生物检il!lj11,;;,~'\ 5 部分逆转A环介导核M~忖lll 扣'用价由11j 法.,本;lj\分为SCI丁720'1. J 的第5 ,部分,本部分按照G?/T 1. ] 2009 给山的N\\l!lj起IE .,ifi Fl Q:本文何的某些内容I可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识刀。这些U 利(f~~HL,水部分rl l 农业农村~ri~渔业渔政笆, JlI!),,)挝11 \ 0,本部分1 11 企可水产标ìfi 化技术委Li 会(SAC/ TC J 56) 归门,本部分起草单位。叶'1]]1水产科学创究院政向水产研究所,本i~i~分主要赳导人怅庆利、JiJ.{,克、)JI出m 、徐灼灼、淤地、邱先、桑松立;、杨冰、$1,斗,SC/T 7204. 5-2020,对虾桃拉综合征诊断规程第5 部分:逆转录,环介导核酸等温扩增检测法,1 范围,水呻分给川(对川、桃.Fi综合111 州市j革机.>J< tt、介忡核股匀ìl,it:lf J(吁检测1止JW'r ,'l;: 以开11 1'11材料、部材和l 设街、,拙作!J;' !9J1和生,'i )lU'IIJi fl~ 要求,水ms分适JIl于刘虾桃N综合11E (1,2 规范性引用文件,SC/ T 7204 . ;,3 缩赂i吾,icat ion),噜lln Jι,aa-am 吁an『,l 八G 八CG TTC,CAG T 3' ,20 ,"mol,I}I物rsv- I主I P CTA CCA TGA GTI,4. 3 10X Isolhermal Ampli,50 mmol/ L JR A '1' A. 1 fl(J 规定执,f J' . - 20.C保存. 避免反复冻融,4. 5 lilt呆:碱( 1如1 日ine) 浓1ft 5 mo l / L. 按人2 规定执行. - 20.C 保存. 避免反复冻融,4. 6 @k llíi饺( M gSO , ) 浓度1 00 m m ol / L , 一20 "C 似有,4.7 M M LV 逆转录ríiUfí浓度200 U /1"L , 一20.C 似存,避免反üì!j、融,4. 8 J3 SI DNA 聚合同'í, ~li?浓度8 UI fl L , 一20.C 保存,避免反复冻融,4. 9 核阪染料20 X Eva Green. 刷品化以剂, 4 .C 保存,或其他等放核阪染料,4. 10 阴阳升I!!H 为已j.11感染\.SV 11. IH PCR 纠U/Rdl~/J~ 1川服11I1性的对虾组织. - 80.C 似存,4. 11 旧1'lt对!!t(为已知l 未感染TSV 11. RT- PC R 纺织Jr~.7J亏阴性的对虾组织80.C 1且在,内含2 0 mmol/ L Tr i 忖H CI.,20 . "X其他Tf 放~1~ 1l1~t 4)' 附级,SC/T 7204. 5-2020,4. 12 空I~I )(.) J!i叹为R Nasc- f rcc 水,5 器材和设备,5. 1 f~民ir'i移液糕,5. 2 tz{ 心机,5. 3 手学型离心机,5. 4 普通冰箱,5.5 -80'C 超低讯冰箱,5. 6 涡Ji/t振荡器,5. 7 元R N A 阴阳的1. 5 III L r'tS心价,5.8 无R NA N郎的0 . 2 mL PCR 衍,5. 9 元R NA 怖的微盐移液枪头,5. 1 。当J I.t头'光定址PCR 仪,6 操作步骤,6. 1 样晶的准备和RNA 的提取,6. 11 样rWr ìiì~千:r方法和中'U,i', R N i\ 捉1&烛; SC/丁720'1 . 3-2007 "1" 7. 2 ,f11 7. 3 的要求,或采用句向效果的,商品化U\ 蝔I)企,6. 1 2 核般捉i仅完成后测定RNA 浓度平11质茧,将R NA 稀释为10 n g/ I"L~ ]O O ng/μL , lTR 10μ L 分装1,O. 2 时. PCR 1~; '1' ,在65'C 条件下{JMA1 5 nll11 , 然后迅速:i~S: 于rJj(上,完成核酸的变怡,6.2 RT- LAMP 检测,6. 2 1 反应体系配制,践表l 的要求,在冰企仁的低瓶状态下配tlJll RT- LA MP 检测反应体系,混匀后,分装为24 V Ll笆;1日l,IN 设Zt空l二l 对lm 、191 亿 对1!t1 平1 川11] 性对!!现。空l主1 )(.)!!ff '1 ' 如l人] VL RNase- f ,ee 水作为放板.阴性对照、待检十年,川、阳性对!!ff '1-'……

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